人間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體激活劑產(chǎn)品說明

產(chǎn)品概述

       人間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體激活劑，是為從人間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)上清中收獲外泌體而特設(shè)的試劑。使用該試劑刺激間充質(zhì)干細(xì)胞96小時(shí)后，細(xì)胞釋放外泌體數(shù)量增加3倍以上。該試劑主要由細(xì)胞因子組合組成，500μl/管/包裝，宜置于-20°C以下儲(chǔ)存。不宜反復(fù)凍融，以免活性丟失。該試劑為1000x，待細(xì)胞密度達(dá)到80%融合時(shí)，換用基礎(chǔ)培養(yǎng)基，并加入外泌體激活劑（1μl/ml），繼續(xù)培養(yǎng)96小時(shí)后收獲培養(yǎng)上清即可。

產(chǎn)品規(guī)格

外泌體分離試劑盒操作說明

材料

        1. 外泌體分離試劑（25 ml/瓶，4 °C避光儲(chǔ)存）

        2. 細(xì)胞培養(yǎng)上清或體液

        3. PBS、生理鹽水或其他平衡鹽溶液

方法

        1. 細(xì)胞培養(yǎng)上清及體液的處理

       （1） 收集細(xì)胞培養(yǎng)上清或體液，室溫條件下離心2000 g，10 min，去除細(xì)胞碎片。

       （2） 將培養(yǎng)上清或體液分別經(jīng)過直徑為1 μm、0.45 μm及0.22 μm濾膜過濾，以去除其中可能存在的凋亡小體。

注：如不經(jīng)過濾，可能存在的凋亡小體將被沉淀并混雜于外泌體中，其中的基因組DNA含量很高，將影響外泌體沉淀的溶解，并影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

       （3） 立即按照以下步驟處理。

注：4 °C儲(chǔ)存72 h，培養(yǎng)上清或體液中的大部分外泌體將被降解。如不能及時(shí)處理，建議將已經(jīng)離心及過濾的標(biāo)本，置于-80 °C儲(chǔ)存。

        2. 外泌體分離

       （1） 取50 ml離心管，加入外泌體分離試劑10 ml。

       （2） 加入經(jīng)過處理的細(xì)胞培養(yǎng)上清40 ml，充分混勻。

       （3） 置于4 °C過夜，或至少6 h。

       （4） 離心，2000 g，30 min。

       （5） 移除液體，再次離心，2000 g，5 min。

       （6） 用pipette小心吸除殘留液體，請勿接觸沉淀。

       （7） 加入PBS 500 μl至1 ml。

       （8） 測定蛋白質(zhì)濃度，或進(jìn)行流式細(xì)胞學(xué)分析。

       （9） 分裝，并將剩余標(biāo)本置于-80 °C儲(chǔ)存。